《浪客剑心：京都大火》讲述了明治维新的背景下，随着新政府逐步稳定，日本却暗藏不安的气息。恶德实业家武田观柳（香川照之 饰）操控女医师高荷惠（苍井优 饰）研制新型鸦片，招募堕落武士，并大肆收购周边土地，逐步实现其恶行计划。与此同时，以“拔刀斋”之名滥杀无辜的鹈堂刃卫（吉川晃司 饰）引起了前新选组头目斋藤一（江口洋介 饰）的关注，迫使隐姓埋名的绯村剑心（佐藤健 饰）重出江湖。虽然剑心渐渐在神谷道场的生活中找到了宁静，但武田观柳的贪婪欲望让人无法忽视，为了保护无辜之人，剑心决定再次拔刀，与相乐佐之助（青木崇高 饰）一起勇闯虎穴，展开一场惊心动魄的对决。